ج-ذنب…………………………………… 19
مبحث دوم- مفهوم و گستره جرم در حقوق کیفری…… 21
-گفتار اول-معنی لغوی جرم………………….. 25
-گفتار دوم-تعریف جرم در معنی اصطلاحی آن……… 27
-گفتار سوم-ملاک جرم در اسلام………………… 32
-گفتار چهارم-مفهوم فقهی جرم از دیدگاه شیعه….. 41
الف-معنای لغوی جرم از دیدگاه فقها………….. 41
ب-معنای اصطلاحی جرم از دیدگاه فقها………….. 42
ج-دیدگاه فقهای اهل سنت……………………. 43
-گفتار پنجم-عناصر تشکیل دهنده جرم………….. 44
الف-عنصر قانونی جرم………………………. 45
ب-عنصر مادی جرم………………………….. 45
ج-عنصر معنوی یا روانی جرم…………………. 45
-گفتار ششم-عناصر تشکیل دهنده جرم در اسلام……. 55
مبحث سوم- تفکیک جرم و گناه در حقوق کیفری مدرن.. 62
فصل سوم: رابطه جرم و گناه در حقوق کیفری قبل از انقلاب 66
مبحث نخست- دوران مشروطه…………………… 67
-گفتار اول-اصل دادرسی شرعی و عرفی………….. 68
-گفتار دوم-حقوق کیفری ایران قبل از مشروطه…… 71
مبحث دوم- دوران پس از مشروطه………………. 72
-گفتار اول-ویژگی­های حقوق جزای وضعی…………. 73
-گفتار دوم-ویژگی­های حقوق جزای وضعی

 

دوره شاه…. 79
-گفتار سوم-پس از پیروزی انقلاب اسلامی………… 85
فصل چهارم: رابطه جرم و گناه پس از انقلاب…….. 87
مبحث نخست- جرایم حد، قصاص و دیات…………… 87
-گفتار اول-جرائم حدی……………………… 87
الف-تعریف حد و اقسام آن…………………… 87
ب-کیفر­های زنا……………………………. 88
-گفتار دوم-قصاص………………………….. 89
-گفتار سوم-دیا ت………………………….. 93
الف-مسئولیت مدنی یا دیه…………………… 93
ب-میزان دیه……………………………… 95
مبحث دوم- تعزیرات و مجازاتهای بازدارنده…….. 98
-گفتار اول-تعزیر…………………………. 98
الف-نظرات فقهای امامیه……………………. 99
ب-تعریف حقوقی تعزیر………………………. 101
فصل پنجم: نتیجه‌گیری………………………. 105
منابع …………………………………………………………………………………………………………………………. 111


چکیده
مفاهیم گناه و جرم از جمله مفاهیمی هستند که در عرصه اذهان عمومی جوامع سنتی تفکیک مشخصی ندارند.مصادیق جرم و گناه گرچه در مواردی هم­پوشانی دارند، اما در اصل مفاهیمی جدا هستند؛جرم اقدام به عملی است که منع قانونی دارد و قانونگذار برای آن مجازاتی در نظر گرفته است.در مقابل انجام گناه ارتکاب به عملی است که در منابع دینی منع و نهی شده است و مجازاتی اخروی نیز برای عامل آن در نظر گرفته شده است.
در جوامع عرفی و سنتی به طور تاریخی تفکیکی بین جرم و گناه نبوده است و گناه که مفهومی شرعی است بت جرم که مفهومی عرفی است قرابت نزدیکی داشته است.در دنیای سنتی دیروز ، آموزه­های دین و دستورات شرع کمابیش همان نقشی را در تعیین شیوه صحیح و پذیرفته انجام امور اجتماع داشته­اند که امروزه قوانین مدنی در جامعه دارند.
با گذر زمان و پیشرفت دانش بسیاری مسائل جدید مطرح شده­اندکه مستلزم ایجاد قوانین جدید هستند.بسیاری از این مسائل نوین مشمول حوزه تاریخی شرع و مذهب نگشته­اندو لذا تخلف از آنان جنبه گناه به خود نگرفته است.
رعایت قوانین مرتبط با مسائل و قرارداد­های دنیای نوین با معین کردن جرم و مقرر کردن جریمه­هایی تضمین می­شود که مفاد حقوقی کاملاً معین و ملموس دارند و بار گناه بر آنها مترتب نیست.البته بسیارند مصادیقی که هم از لحاظ حقوقی جنبه جرم دارند و هم از لحاظ دینی جنبه گناه.ولی جریمه­هایی که قوانین مدنی جوامع نوین برای چنان اعمال مجرمانه تعیین می­کند تنها با توجه بر جنبه مجرمانه آنها و آسیب­های آن به جامعه مدنی تعیین می­شود و نه با نگاهی به جنبه گناه بودن آنها.
با وصفی که رفت در جهان امروز مفاهیم جرم و گناه دو مفهوم کاملاًجدا و منفک هستند.

 بازگذاشتن بازگذاشتن کار بر کسی،حاکم گردانیدن کسی را در امری سپردن و باز گذاشتن کار خود به کسی یا به خدا واگذاری و تسلیم و سپردگی، اختیار مقابل جبر و در معنای تفویض کردن آورده‌اند که به معنای تسلیم کردن و بخشیدن است[1]. آنچه گفتیم معنای لغوی تفویض بود و امّا تفویض در اصطلاح یعنی کار به کسی بازگذاشتن و به معنای واگذاری است. اساس دادن نیابت از دیدگاه برخی حقوقدانان، تفویض اختیار است و اذن را منشأ تفویض اختیار می‌دانند و گاهی معانی‌ای از تفویض ارائه می‌دهند مانند:

1) اعطاء شغل و سمت دولتی در مقامات عالیه مانند تفویض منصب قضاء؛

2) آزادی ارادۀ انسان در فعل و ترک که خداوند به او تفویض کرده است (= اصل آزادی ارادۀ کلامی) و آن را استطاعت هم گفته‌اند و معتقدین به این نظر را مفوضّه و قدریه گفته‌اند و ضد آن، جبر است؛

3) در حقوق خانواده عبارتست از ترک ذکر مهر در عقد نکاح و یا شرط عدم مهر در نکاح و یا موکول کردن مقدار مهر به نظر زوج و یا زوجه و یا ثالث(ماده 1087 ق.م)[2]؛ و لیکن آنچه منظور ما از اصطلاح تفویض است در هیچکدام از این تعاریف نمی‌گنجد، بلکه مقصود از تفویض انتقال حقّ طلاق از زوج به زوجه بصورت تام و تمام در اجرای صیغۀ طلاق می‌باشد که در نزد اکثر فقهای اهل تسنّن پذیرفته شده است، به

 

گونه‌ای که از آن تسلیط زن بر سرنوشت نکاح برداشت می‌شود به‌طوری که اگر بخواهد نکاح را منحل می‌کند و اگر بخواهد آن را باقی می‌گذارد. تفویض عبارتست از واگذاری طلاق به زن و مختار کردن او در تعیین تکلیف خود، به‌طوری که اگر طلاق را اختیار کند این امر به وقوع می‌پیوندد.[3]

با توجه به ادله و روایاتی که در این زمینه وجود دارد. تفویض در فقه امامیه پذیرفته نشده و قول به عدم جواز آن غلبه دارد و لیکن در فقه عامّه آن را به عنوان یکی از طرق نیابت پذیرفته‌اند و غالباً آن را به سه صورت توکیل، تخییر و تملیک مورد بحث قرار می‌دهند. از آنجا که معنای تفویض در اصطلاح فقهی و حقوقی، از معنای لغوی آن زیاد دور نیافتاده است، لذا فقهاء از تفویض طلاق تعاریف گوناگونی ارائه داده‌اند که به برخی از آن اشاره می‌کنیم:

الف) «تفویض را تملیک حق طلاق به زن می‌دانند[4] و یا «تملیک نمودن طلاق به غیر»[5].

ب) «تفویض عبارتست از تعلیق امر طلاق بر خواست و ارادۀ شخص اجنبی و بیگانه»[6]

ج) «تفویض عبارتست از تسلیط زن بر سرنوشت نکاح به‌طوری که اگر بخواهد نکاح را منحل کند و اگر بخواهد آن را باقی بگذارد و در نتیجه به ادامۀ زندگی با همسر خود بپردازد.»[7]

د) تفویض عبارتست از واگذاری طلاق به زن و مختار کردن او در تعیین تکلیف خود به‌طوری که اگر طلاق را اختیار کند، این امر به وقوع بپیوندد.با تفویض حق طلاق به زوجین، این حق از شخص زوج سلب خواهد شد وزن، اختیار تام و تمام در جدایی از شوهر و یا عدم آن را خواهد داشت.[8] در کتب فقهی یا تفویض همراه با تخییر به کار رفته و یا بجای آن از تخییر استفاده شده است بدین گونه که زوجه مخیر بین انتخاب طلاق و یا ادامۀ زندگی با شوهر خود باشد و از جواز و یا عدم جواز آن صحبت شده است که به تفصیل در فصل سوم به آن خواهیم پرداخت.[9]

[1]. لغت نامۀ دهخدا، جلد 5، پیشین، ص 6864.

های خاک تحت تاثیر تیمار های کودی قرار نگرفتند. در گیاه کود دامی باعث افزایش ارتفاع، وزن خشک دانه، چوب بلال، پوست بلال، بلال، برگ، ساقه، کل بوته، هم چنین افزایش سطح برگ، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک گردید. کود اوره نیز باعث افزایش همه صفات بالا به علاوه وزن خشک تاج گل شد. کود بیولوژیک نیتروکسین هم مانند کود دامی به طور معنی داری باعث افزایش همه صفات به جز وزن خشک تاج گل و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک شد. در مورد اثرات متقابل، اثر متقابل دوجانبه کود دامی و کود اوره، وزن خشک دانه، پوست بلال، بلال، برگ، ساقه، کل بوته، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک را تحت تاثیر خود قرار داد. اثر متقابل دو جانبه کود دامی و کود بیولوژیک نیز بر وزن خشک دانه، پوست بلال، بلال، کل بوته، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک معنی دار گردید. وزن خشک دانه نیز تحت تاثیر اثر متقابل کود اوره و کود بیولوژیک قرار گرفت. اثر متقابل سه جانبه کود دامی، اوره و بیولوژیک نیز تنها بر وزن خشک دانه، برگ و بلال معنی دار شد. به طور خلاصه می توان اینگونه نتیجه گیری کرد که کود دامی و بیولوژیک نه تنها باعث بهبود برخی از خصوصیات فیزیکو شیمیایی خاک شده اند بلکه عملکرد ذرت را نیز افزایش داده اند و چون کودهای شیمیایی به دلیل تجمع در خاک به مرور زمان باعث تخریب خاک ها می شوند می توان به صورت تلفیقی از این کودها استفاده کرد تا زمینه برای رسیدن به کشاورزی ارگانیک در سطح وسیع مهیا شود.

کلمات کلیدی : ذرت، کود بیولوژیک، کود شیمیایی، کود دامی

فهرست مطالب

عنوان
صفحه
فصل اول : مقدمه
1
1-1 مقدمه
 
 
 
فصل دوم : مروری بر مطالعات پیشین
4
2-1- تاریخچه و اهمیت اقتصادی ذرت
5
2-2- خصوصیات گیاهی
7
2-3- انواع ذرت
9
2-4- سازگاری
11
2-5-کود لازم برای ذرت
12
2-6- کشت و کار ذرت
13
2-6-1- فاصله کاشت
13
2-6-2- میزان بذر
14
2-6-3- عمق بذر
14
2-7- عملیات داشت
14
2-7-1-کولتیواتور و دندانه زدن
14
2-7-2- وجین کردن
15
2-7-3- آبیاری
15
2-7-4- مبارزه با آفات و بیماری ها
15
2-8- برداشت
15
2-9- مراحل نمو
16
2-10- هیبرید های ذرت
17
 
 
2-10-1- بذر ذرت هیبرید سینگل کراس704
17
2-11- کود های حیوانی
18
2-12- کود های بیولوژیک
21
2-12-1-کودبیولوژیک نیتروکسین
25
2-12-2- مرفولوژی آزوسپریلیوم
25
2-12-3- مشخصات فیزیولوژیک ازتوباکتر
26
2-13- نیتروژن
26
2-13-1- اهمیت نیتروژن وفراوانی آن در طبیعت
26
2-13-2- مقدار و اشکال نیتروژن در خاک
27
2-14- اوره
27
2-14-1- مشکلات مرتبط با کود های اوره
29
2-15- اثرات کود های نیتروژنه بر گیاه
30
2-16- اثر مواد آلی بر خصوصیات خاک
31
2-16-1-اثربرخصوصیات فیزیکی خاک
31
2-16-2- اثر بر خصوصیات شیمیایی خاک
32
2-16-2-1- هدایت

 

الکتریکی
33
2-16-2-2- واکنش خاک
33
2-16-2-3- ظرفیت تبادل کاتیونی
33
2-16-2-4- کربن آلی
33
2-16-2-5- ازت
33
2-16-2-6- فسفر
34
2-16-3- اثر بر خواص بیولوژیکی خاک
35
2-16-4- اثر عملکرد گیاه
35
 
 
فصل سوم : مواد و روش ها
37
3-1- موقعیت شهرستان دامغان
38
3-2- اندازه گیری خصوصیات شیمیایی و فیزیکی خاک
39
3-3- طرح آزمایشی
42
3-4- آماده کردن بذور
43
3-5- آماده سازی زمین – کاشت بذور
43
3-6 – مرحله داشت
44
3-7- برداشت
44
3- 8- تجزیه آماری داده ها
45
 
 
فصل چهارم: نتایج و بحث
46
4-1- پارامتر های اندازه گیری شده در خاک
47
4-1-1- خواص شیمیایی خاک
47
4-1-1-1- درصد اشباع
47
4-1-1-2- شوری
47
4-1-1-3- اسیدیته
48
4-1-1-4- کربن آلی
48
4-1-1-5- نیتروژن کل
50
4-1-1-6- فسفر قابل جذب
53
4-1-1-7 – پتاسیم قابل جذب
55
4-1-1-8- کلسیم ،منیزیم و سدیم محلول
56
4-1-1-9- کلر، سولفات و بیکربنات
57
4-1-1-10- نسبت جذبی سدیم
57
4-1-2- خواص فیزیکی خاک
57
4-1-2-1- بافت خاک
57
4-1-2-2- وزن مخصوص ظاهری
58
4-1-2-3- درصد تخلخل
59
4-2- صفات اندازه گیری شده در گیاه
60
4-2-1- ارتفاع
60
4-2-2- وزن خشک دانه
63
4-2-3-وزن خشک چوب بلال
67
4-2-4- وزن خشک پوست بلال
70
4-2-5- وزن خشک بلال
73
4-2-6- وزن خشک برگ
76
4-2-7- وزن خشک ساقه
79
4-2-8- وزن خشک تاج گل
82
4-2-9- وزن خشک کل بوته
82
4-2-10- سطح برگ
86
4-2-11- عملکرد بیولوژیک
88
4-2-12- نسبت وزن دانه به وزن ماده خشک
91
 
 
فصل پنجم: نتیجه گیری و پیشنهادات
95
5-1- جمع بندی نتایج
96
5-2- پیشنهادات.
97
پیوست
98
منابع
120
 

 

 

 

فهرست اشکال
 
شکل4-1- مقایسه میانگین درصد اشباع تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
47
شکل 4-2- مقایسه میانگین کربن آلی تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
49
شکل 4-3- مقایسه میانگین کربن آلی تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
49
شکل 4-4- مقایسه میانگین کربن آلی تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و کود اوره
50
شکل4-5- مقایسه میانگین نیتروژن کل تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
51
شکل4-6- مقایسه میانگین نیتروژن کل تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
51
شکل4-7- مقایسه میانگین نیتروژن کل تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
52
شکل 4-8- مقایسه میانگین فسفر قابل جذب تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
53
شکل 4-9- مقایسه میانگین فسفر قابل جذب تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
54
شکل4-10- مقایسه میانگین پتاسیم قابل جذب تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
55
شکل4-11- مقایسه میانگین پتاسیم قابل جذب تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
55
شکل 4-12- مقایسه میانگین سدیم تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
56
شکل4-13- مقایسه میانگین SARتحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
57
شکل4-14- مقایسه میانگین وزن مخصوص ظاهری تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
58
شکل4-15-مقایسه میانگین تخلخل تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
59
شکل 4-16- مقایسه میانگین ارتفاع گیاه تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
60
شکل 4-17- مقایسه میانگین ارتفاع گیاه تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
61
شکل 4-18- مقایسه میانگین ارتفاع گیاه تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
62
شکل4-19-مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
63
شکل 4-20- مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
64
شکل4-21- مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
65
شکل4-22-مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و کود اوره
66
شکل4-23- مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک و دامی
66
شکل 4-24- مقایسه میانگین وزن خشک دانه تحت تاثیر سطوح مختلف بیولوژیک و اوره            
67
شکل4-25- مقایسه میانگین وزن خشک چوب تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی                  
68
شکل4-26- مقایسه میانگین وزن خشک چوب تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
69
شکل4-27- مقایسه میانگین وزن خشک چوب تحت تاثیرسطوح مختلف کود بیولوژیک
69
شکل4-28- مقایسه میانگین وزن خشک پوست تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی                
70
شکل 4-29- مقایسه میانگین وزن خشک پوست تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
71
شکل4-30- مقایسه میانگین وزن خشک پوست تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
71
 
 
شکل4-31- مقایسه میانگین وزن خشک پوست تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
72
شکل4-32- مقایسه میانگین وزن خشک پوست تحت تاثیرسطوح مختلف کود دامی و بیولوژیک
72
شکل4-33- مقایسه میانگین وزن خشک بلال تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
73
شکل4-34- مقایسه میانگین وزن خشک بلال تحت تاثیرسطوح مختلف کود اوره
73
شکل4-35- مقایسه میانگین وزن خشک بلال تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
74
شکل4-36- مقایسه میانگین وزن خشک بلال تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
75
شکل 4-37- مقایسه میانگین وزن خشک بلال تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی وبیولوژیک
75
شکل 4-38- مقایسه میانگین وزن خشک برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
76
شکل4-39- مقایسه میانگین وزن خشک برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
77
شکل 4-40- مقایسه میانگین وزن خشک برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
77
شکل 4-41- مقایسه میانگین وزن خشک برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
78
شکل 4-42- مقایسه میانگین وزن خشک ساقه تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
79
شکل 4-43- مقایسه میانگین وزن خشک ساقه تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
80
شکل 4-44- مقایسه میانگین وزن خشک ساقه تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
81
شکل 4-45- مقایسه میانگین وزن خشک ساقه تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
81
شکل 4-46- مقایسه میانگین وزن خشک تاج گل تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
82
شکل 4-47- مقایسه میانگین وزن خشک کل بوته تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
83
شکل 4-48- مقایسه میانگین وزن خشک کل بوته تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
83
شکل 4-49- مقایسه میانگین وزن خشک کل بوته تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
84
شکل 4-50- مقایسه میانگین وزن خشک کل بوته تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
85
شکل 4-51- مقایسه میانگین وزن خشک کل بوته تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و بیولوژیک
86
شکل 4-52- مقایسه میانگین سطح برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
86
شکل 4-53- مقایسه میانگین سطح برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
87
شکل 4-54- مقایسه میانگین سطح برگ تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
88
شکل 4-55- مقایسه میانگین عملکرد بیولوژیک تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
89
شکل 4-56- مقایسه میانگین عملکرد بیولوژیک تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
89
شکل 4-57- مقایسه میانگین عملکرد بیولوژیک تحت تاثیر سطوح مختلف کود بیولوژیک
90
شکل 4-58- مقایسه میانگین عملکرد بیولوژیک تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
90
شکل 4-59- مقایسه میانگین عملکرد بیولوژیک تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و بیولوژیک
91
شکل 4-60- مقایسه میانگین تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی
92
شکل 4-61- مقایسه میانگین تحت تاثیر سطوح مختلف کود اوره
92
شکل 4-62- مقایسه میانگین تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و اوره
93
شکل 4-63- مقایسه میانگین تحت تاثیر سطوح مختلف کود دامی و بیولوژیک. 92
94
شکل پیوست 1- نقشه کشت
99
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فهرست جداول
 
جدول پیوست 1- برخی از خصوصیات خاک مورد نظر قبل از انجام آزمایش
100
جدول پیوست2- برخی از خصوصیات کود گاوی مورد استفاده در آزمایش
100
جدول پیوست3- تجزیه واریانس پارامترهای اندازه گیری شده درخاک (درصد اشباع، شوری، کربن آلی، اسیدیته، ازت کل، فسفر قابل جذب، پتاسیم قابل جذب)،تحت تاثیر عوامل آزمایش
101
جدول پیوست4- مقایسه میانگین اثرات اصلی تیمار های کودی درخاک(درصد اشباع، شوری، کربن آلی،   اسیدیته، ازت کل، فسفر قابل جذب، پتاسیم قابل جذب)،تحت تاثیر عوامل آزمایش
102
جدول پیوست5- مقایسه میانگین اثرات دو جانبه تیمار های کودی درخاک (درصد اشباع، شوری، کربن آلی، اسیدیته، ازت کل، فسفر قابل جذب، پتاسیم قابل جذب) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
103
جدول پیوست6- مقایسه میانگین اثرات سه جانبه تیمار های کودی درخاک (درصد اشباع، شوری، کربن آلی، اسیدیته، ازت کل، فسفر قابل جذب، پتاسیم قابل جذب) ،تحت تاثیر عوامل آزمایش
104
جدول پیوست7-تجزیه واریانس پارامترهای اندازه گیری شده درخاک (کاتیونها و آنیون ها)، تحت تاثیر عوامل آزمایش
105
جدول پیوست8- مقایسه میانگین اثرات اصلی تیمار های کودی درخاک (کاتیونها و آنیون ها) ، تحت تاثیرعوامل آزمایش
106
جدول پیوست9- مقایسه میانگین اثرات دو جانبه تیمار های کودی درخاک (کاتیونها و آنیون ها) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
107
جدول پیوست10- مقایسه میانگین اثرات سه جانبه تیمار های کودی درخاک (کاتیونها و آنیون ها) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
108
جدول پیوست11- تجزیه واریانس پارامترهای اندازه گیری شده در خاک (SAR ، بافت، وزن مخصوص ظاهری ،تخلخل ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
109
جدول پیوست12- مقایسه میانگین اثرات اصلی تیمار های کودی درخاک (SAR ، بافت، وزن مخصوص ظاهری ، تخلخل ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
110
جدول پیوست13- مقایسه میانگین اثرات دوجانبه تیمار های کودی درخاک(SAR ، بافت، وزن مخصوص ظاهری ، تخلخل) تحت تاثیر عوامل آزمایش
111
جدول پیوست14- مقایسه میانگین اثرات سه جانبه تیمار های کودی درخاک (SAR ، بافت، وزن مخصوص ظاهری ، تخلخل ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
112
جدول پیوست15- تجزیه واریانس پارامترهای اندازه گیری شده در گیاه (ارتفاع ، وزن
113
خشک دانه ، چوب بلال ،پوست بلال، بلال و برگ ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
 
جدول پیوست16-مقایسه میانگین اثرات اصلی تیمار های کودی در گیاه(ارتفاع ، وزن خشک دانه ، چوب بلال ،پوست بلال، بلال و برگ ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
114
جدول پیوست 17- مقایسه میانگین اثرات دوجانبه تیمار های کودی در گیاه (ارتفاع ، وزن خشک دانه ، چوب بلال ،پوست بلال، بلال و برگ ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
115
جدول پیوست 18- مقایسه میانگین اثرات سه جانبه تیمار های کودی در گیاه (ارتفاع ، وزن خشک دانه ، چوب بلال ،پوست بلال، بلال و برگ ) تحت تاثیر عوامل آزمایش
116
جدول پیوست 19- تجزیه واریانس پارامترهای اندازه گیری شده در گیاه ( وزن خشک ساقه، تاج گل ،کل بوته ، سطح برگ ، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
117
جدول پیوست 20- مقایسه میانگین اثرات اصلی تیمار های کودی در گیاه( وزن خشک ساقه، تاج گل ،کل بوته ، سطح برگ ، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
118
جدول پیوست 21- مقایسه میانگین اثرات دوجانبه تیمار های کودی در گیاه( وزن خشک ساقه، تاج گل ،کل بوته ، سطح برگ ، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
119
جدول پیوست 22- مقایسه میانگین اثرات سه جانبه تیمار های کودی در گیاه( وزن خشک ساقه، تاج گل ،کل بوته ، سطح برگ ، عملکرد بیولوژیک و نسبت وزن خشک دانه به وزن ماده خشک) ، تحت تاثیر عوامل آزمایش
120
 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فصل اول :

مقدمه

 

 

 

 

گیاهان زراعی برای رشد و تولید محصول به عناصر غذایی نیاز دارند. این عناصر عمدتا از طریق خاک و هم چنین کودهای شیمیایی در اختیار گیاهان قرار می گیرند. از بین گیاهان زراعی انواع علوفه ای عاملی مهم در توسعه کشاورزی محسوب می شوند چرا که با توجه به روند رو به افزایش جمعیت و نیاز مردم به گوشت و شیر و سایرفراورده های لبنی حاصل از آن، تامین علوفه مورد نیاز جمعیت دامی ضروری بوده و استفاده بهینه از منابع پایه آب، خاک و گیاه را امری اجتناب ناپذیر نموده است. از خصوصیات برتر گیاهان علوفه ای در رسیدن به کشاورزی پایدار می توان به مقاومت برخی از آنها به شرایط بد محیطی، طول دوره رویش کوتاه و در نتیجه استفاده بهینه از منابع کم آبی، به حداقل رساندن فرسایش و افزایش حاصلخیزی خاک، تثبیت بیولوژیک ازت هوا و به تبع آن کاهش مصرف کود و سموم شیمیایی، کشت مخلوط آنها ومدیریت تلفیقی آفات، بیماری ها وعلف های هرز و کشاورزی حفاظتی و جلوگیری از آب شویی ازت اشاره نمود.

به منظور افزایش تولید این دسته از گیاهان (گیاهان علوفه ای) مانند سایر گیاهان یا باید سطح زیر کشت و یامیزان تولید در واحد سطح را افزایش داد. راهکار اول به دلیل محدودیت در منابع آب و خاک به ویژه در قرن اخیر چندان مقرون به صرفه نیست. اما راهکار دوم باید به گونه ای در جهت کاهش آلودگی خاک با کودهای شیمیایی و سموم اجرایی شود، زیرا آلودگی منابع خاک وآب زنجیره وار به چرخه غذایی انسان راه یافته و سلامت جوامع انسانی را مورد تهدید قرار می دهد. در این راستا استفاده از کودهای بیولوژیک و دامی نه تنها باعث افزایش عملکرد در واحد سطح می شوند بلکه باعث کاهش آلودگی خاک در اثر استفاده بی رویه از کودهای شیمیایی می گردند، زیرا کود های شیمیایی نمک هایی مخرب و قوی هستند که در دراز مدت خصوصیات فیزیکی و شیمیایی خاک ها را تخریب می کنند، در حالی که کود های بیولوژیک شامل انواع مختلف ریز موجودات آزادزی هستند که توانایی تبدیل عناصر غذایی اصلی را از فرم قابل دسترس طی فرایند های بیولوژیک را داشته و منجر به توسعه سیستم ریشه ای و جوانه زنی بهتر بذور می گردند.

با توجه به مطالب بیان شده و این که در بین کشاورزان منطقه مصرف کودهای شیمیایی آن قدر گسترده شده است که زارعان گمان می کنند که هر چه کود بیشتری مصرف کنند، عملکرد بهتری خواهند داشت، بررسی اثر تلقیح بذور با کود های بیولوژیک و استفاده از کود دامی و هم چنین انتخاب مدیریت مناسب تغذیه گیاهی که با اعمال آن کمترین آسیب به خاک وارد شود در این منطقه ضرورت دارد.

اهداف این مطالعه به شرح زیر می باشد :

1) بررسی اثر تلقیح بذور با کود بیولوژیک نیتروکسین بر عملکرد ذرت علوفه ای

2) بررسی تغییرات برخی پارامترهای فیزیکی و شیمیایی خاک در اثر استفاده از کود های بیولوژیک، دامی و شیمیایی

3) انتخاب بهترین مدیریت تغذیه ای جهت نیل به عملکرد مناسب

در کل این پژوهش با هدف افزایش عملکرد در واحد سطح ذرت علوفه ای و هم چنین کاهش مصرف کودهای شیمیایی و حفظ محیط زیست در منطقه امیران شهرستان دامغان صورت گرفته است.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

فصل دوم :

بررسی منابع

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2-1-تاریخچه و اهمیت اقتصادی ذرت

ذرت از پر محصول ترین غلات به شمار می رود به طوری که آن را سلطان غلات نامیده اند و از لحاظ مقدار کل تولید بعد از گندم و برنج سومین گیاه زراعی مهم در دنیا است (33و 99).

ذرت یکی از گیاهان بومی آمریکای مرکزی و جنوبی است. سابقه کاشت آن در کشور های دیگر جهان که شرایط برای رشد و نمو مساعد بوده، بویژه در برخی از کشورهای اروپا، آسیا، آفریقا و اقیانوسیه چندان طولانی نیست (14).

ذرت از خانواده گرامینه[1] و جنس زئا [2] است. در این جنس گونه ای به نام مایز[3] وجود دارد که همان ذرت زراعی است (8).

دو جنس در خانواده گرامینه وجود دارد که به جنس زئا خیلی نزدیک می باشند، یکی تریپساکوم[4] که به طور خودرو در نواحی شرقی و جنوب شرقی ایالات متحده امریکا و در امریکای مرکزی و جنوبی رشد می کند. گونه هایی از این جنس با 18 و36 جفت کروموزوم دیده شده اند. دیگری یوکلانا[5] است که گونه ای از آن مکزیکانا[6] نام دارد که در زبان انگلیسی به آن تئوسینت [7] گفته می شود. گونه مزبور بومی مکزیک و گواتمالا بوده و نزدیکترین گیاه به گونه ذرت زراعی است. این گونه مانند ذرت 10 جفت کروموزوم دارد (183).

چندین فرضیه درباره طرز پیدایش ذرت وجود دارد، بر طبق یکی از این فرضیه ها که قدیمی تر است، ذرت ازتئوسینت یا اجداد آن مشتق شده است ولی بنابر تئوری جدید تر، این گیاه از نوعی ذرت به نام پادکورن[8] بدست آمده است (62). تا قبل از سال 1492میلادی (سال کشف آمریکا) ذرت در اروپا، آفریقا و اسپانیا ناشناخته بود . کریستوف کلمب در اولین مسافرت تاریخی خود به امریکا در نوامبر سال 1492 میلادی ذرت را در حوالی کوبا مشاهده کرد و دریافت که ذرت، رایج ترین گیاه آن قاره است. او انواعی از ذرت را مشاهده کرد که بوسیله سرخپوستان ماهیز[9] کشت می شده و از دانه های آن تغذیه می کردند. نام این گیاه در حقیقت از نام این قبیله اقتباس شده است (9 و15). در سال 1937 میلادی لینه نام علمی Zea mays را به آن داد (102).

در حال حاضر ( zea mays L.) به عنوان یکی از مهمترین گیاهان زراعی، در بسیاری از نقاط دنیا مورد کشت و کار قرار می گیرد. استفاده از اندامهای مختلف ذرت (دانه، برگ و ساقه) در تغذیه دام و طیور نقش مهمی در تولید فراورده های پروتئینی مورد نیاز انسان دارد (57).

[1] Graminae

[2] Zea

[3]Maize

[4] Tripsacum

[5] Eucleana

پایان نامه درمورد مدیریت سود-اقلام نقدی سود
اقلام تعهدی و اقلام نقدی سود:

در دنیای واقعی، دریافت ها و پرداختهای نقدی در دوره هایی اتفاق می افتد که معمولاً با زمان وقوع معاملات و رویدادهای ایجاد کننده آن ها متفاوت است و همین امررابطه بین کیفیت حسابرس و قابلیت اتکای اقلام تعهدی باعث میشود تا استفاده از اقلام تعهدی (فرض تعهدی) برای اندازه گیری نتایج عملکردواحد تجاری، بهتر از اندازه گیری خالص دریافتهای نقدی شود. اما مسئله این است که اقلام تعهدی برخلاف اقلام نقدی با درجه ای از ابهام همراه هستند که باعث کاهش قابلیت اتکای آ نها می شود [5]. اما در این میان، با توجه به مسئله تضاد منافع بین مالکیت و مدیریت، اقلام تعهدی ارایه شده در صورت های مالی می تواند به وسیله ی مدیران دستکاری شده و قابلیت اتکای آ نها زیر سؤال رود.

2-6-7- اندازه شرکت:

پژوهشگران حسابداری بر مبنای حدس و گمان اقتصاددانان فرض می کنند، شرکت های بزرگ تر نسبت به شرکت های کوچک تر حساسیت سیاسی بالاتری دارند و بنابراین با انگیزه های متفاوتی در انتخاب روش های حسابداری روبرو هستند. همانگونه که واتر و زیمرمن در فرضیه های تئوری اثباتی خود بیان نمودند، اغلب اندازه یا بزرگی شرکت منجر به هزینه های سیاسی می شود. به ویژهاگر شرکت های بزرگ از سودآوری بالایی برخوردار باشند. این هزینه ها به شدت افزایش میابد. در این مواقع مدیران آنگونه شرکت ها روش هایی از حسابداری را بکار خواهد گرفت تاسودها رابه تعویق اندازند (اسکات،2003).از طرف دیگر به اعتقاد میرکار (2008)، اندازه شرکت به عنوان فاکتوری از میزان در دسترس بودن اطلاعات مورد استفاده قرار می گیرد. به این معنا که اطلاعات شرکت های بزرگ بیش تر از شرکت های کوچک در دسترس همگان قرار دارد. این موضوع سبب کاهش مساله اطلاعات نا متقارن در شرکت های بزرگ شده و می تواند در انتخاب نوع مدیریت سود توسط مدیران اثرگزار باشد بررسی ها نشان می دهد که شرکت های بزرگ با انگیزه کاهش هزینه های سیاسی و شرکت های کوچک با انگیزه اجتناب از گزارش زیان اقدام به مدیریت سود می کند. طبق گفته زیمرمن (1994) مدیریت سود برآیند درجه ای از قابلیت انعطاف و هعمال نظری است که مدیران بر گزارشگری مالی خود دارند. مدیران ممکن است از این قدرت خود برای مدیریت فرصت طلبانه سود انتقال اطلاعات محرمانه درباره عملکرد آتی شرکت استفاده نمایند.

2-6-8- هدف ها و انگیزه های مدیریت سود:

کاپلاند (1968) توانایی نسبی در کاهش و یا افزایش سود گزارش شده توسط مدیران را به عنوان دستکاری در حساب ها معرفی میکند. عناوینی مانند (حداکثر کنندگان)، (حداقل کنندگان) و یا (هموار کنندگان)، به طور تلویحی به افرادی گفته میشود که به دستکاری حساب ها اقدام میکنند. البته دستکاری در حسابها، حوزه وسیع تری را نسبت به انچه کاپلاند بدان اشاره کرده بود در بر میگیرد. از جمله نحوه طبقه بندی اقلام درصورت سود و زیان که به دفعات در ادبیات حسابداری مطرح شده است، و یا مورد مرتبط با ترازنامه که البته کمتر بدان اشاره شده است.از سوی دیگر، انگیزه برای دستکاری سود در حساب ها از جمله مواردی است که نیازمند توجه بیشتری است. گاهی مدیران از حساب ها به عنوان ابزاری برای نمایش غیر

 

واقعی حصول اهداف بلند مدت شرکت ویا کاهش مصنوعی ریسک متصور، استفاده میکنند. مدیریت سود در تحقیقات دانشگاهی توجه زیادی را به خود جلب کرده است. ادبیات اولیه در حوزه مدیریت سود به ازمون تاثیر گزینش های حسابداری بر بازار سرمایه پرداخته است و کانون تمرکز اصلی آن، تمایز میان دو فرضیه رقیب بوده است. فرضیه مکانیکی که در ادبیات حسابداری دهه 60میلادی رایج بوده، بیانگر این است که استفاده کنندگان صورت های مالی، منابع اطلاعاتی غیر از گزارش های مالی شرکت ها را مورد استفاده قرار نمیدهند وسرمایه گذاران صرفا بر اساس ارزش های ظاهری منعکس در اطلاعات مالی گزارش شده توسط شرکت ها تصمیمات خود را اتخاذ می کنند. رقیب فرضیه مکانیکی اصطلاحا فرضیه بازار کارا نامیده میشود. فرضیه بازار کارا پارادایم حکم فرما بر تحقیقات حسابداری مالی در دهه 70 میلادی، بیانگر این است که قیمت های بازار تمام اطلاعات در دسترس را به طور کامل منعکس میکند(واتز و زیمرمن،1986). در پاسخ به این سوال که چرا شرکت ها  به تغییرات حسابداری ارایشی متوسل میشوند، واتز و زیمرمن نظریه اثباتی خود را به عنوان بدیلی برای توصیف تغییرات حسابداری ارایشی تدوین کردند. این نظریه انگیزه هایی غیر از انگیزه های مرتبط با بازار سرمایه را برای مدیریت سود توسط شرکت ها مطرح نمود. فرضیه های اصلی مطرح شده توسط واتز و زیمرمن عبارت است از فرضیه طرح پاداش، فرضیه قرارداد بدهی و فرضیه هزینه های سیاسی که در مباحث بعدی به انها پرداخته خواهد شد. تِو و ونگ (1998) بیان میدارند، حسابداری تعهدی حق انتخاب قابل توجهی به مدیران در تعیین سود در دوره های زمانی متفاوت اعطاء میکند. در واقع تحت این نوع از سیستم حسابداری، مدیران کنترل چشم گیری بر زمان تشخیص برخی اقلام از جمله هزینه های تبلیغات و مخارج تحقیق توسعه دارند. از سوی دیگر مدیران در سیستم حسابداری تعهدی، با گزینه های متفاوتی در مورد زمان تشخیص درامد ها نیز روبروهستند، از جمله تشخیص سریعتر درامد از طریق فروش های نسیه، این گونه عملکرد از سوی مدیران در عبارتی ساده به عنوان (مدیریت سود) یاد میشود. دی جورج و همکاران (1999) مدیریت سود را به عنوان نوعی دستکاری مصنوعی سود توسط مدیریت جهت حصول به سطح مورد انتظار سود برای بعضی تصمیمات خاص (از جمله پیش بینی تحلیل گران ویا براورد روند سودهای قبلی برای پیش بینی سودهای اتی) تعریف میکند. به نظر ایشان، درواقع انگیزه اصلی مدیریت سود، مدیریت تصور سرمایه گذاران در مورد واحد تجاری است. برخی عوامل مدیران شرکت ها را در برخورد با مسایل ترغیب نموده تا سود شرکت را هموار نمایند. مدیران این شرکت ها تلاش میکنند که از طریق هموارسازی مصنوعی سود، رشد سود آوری شرکت های تحت مدیریت خود را یکنواخت نشان دهند. یکی دیگر از اهداف مدیریت سود، حفظ اعتبار شرکت است، چون اعتبار شرکت باعث میشود شرکت کارا و پویا به حساب آید. کسب جایگاهی مناسب در میان رقبا و بازار سرمایه باعث میشود سرمایه گذاران و اعتبار دهندگان نسبت به شرکت نظر مساعد تری داشته 

8-1-2- زیستگاه…………………………………………………………………………………………………………………………23
2-2- تاكسونومی…………………………………………………………………………………………………………………………23
1-2-2- سالمونلا تیفی…………………………………………………………………………………………………………………26
2-2-2- سالمونلا انتریتیدیس………………………………………………………………………………………………………..26
3-2-2- سالمونلا كلراسوئیس……………………………………………………………………………………………………….27
4-2-2- سالمونلا پولوروم…………………………………………………………………………………………………………….28
5-2-2- سالمونلا گالیناروم…………………………………………………………………………………………………………..28
6-2-2- سالمونلا آریزونا……………………………………………………………………………………………………………..29
7-2-2- ساختمان آنتی­ژنی………………………………………………………………………………………………………….31
8-2-2- طبقه بندی سالمونلا به منظور اهداف اپیدمیولوژیكی………………………………………………………….32
1-8-2-2- ارگانیسم­های موجب عفونت در انسان ………………………………………………………………………..32
2-8-2-2- واریته های سرولوژیكی سازگار با میزبان………………………………………………………………………32
3-8-2-2- واریته های سرولوژیكی ناسازگار…………………………………………………………………………………33
3-2- شاخص­های بیماری­زایی……………………………………………………………………………………………………..33
1-3-2- آنتی­ژن­های سطحی………………………………………………………………………………………………………..33
2-3-2-تهاجم…………………………………………………………………………………………………………………………….33
3-3-2- اندو­توكسین انترو­توكسین سیتو­توكسین …………………………………………………………………………….34
4-2- بیماری­زایی و مكانیسم آن……………………………………………………………………………………………………34
1-4-2- روند بیماری­زایی……………………………………………………………………………………………………………35
2-4-2- میزان شیوع سالمونلوز در انسان……………………………………………………………………………………….35
3-4-2- عفونت­های سالمونلایی در انسان……………………………………………………………………………………..36
1-3-4-2- تب تیفوئید و تب­های روده­ای……………………………………………………………………………………..36
2-3-4-2- سپتی­سمی…………………………………………………………………………………………………………………37
3-3-4-2- گاسترو­انتریت…………………………………………………………………………………………………………….37
4-4-2-

 

علائم بالینی در انسان……………………………………………………………………………………………………..37
5-2- اپیدمیولوژی……………………………………………………………………………………………………………………….38
6-2- روش­های تشخیص…………………………………………………………………………………………………………….40
1-6-2- روش­های فنوتیپی…………………………………………………………………………………………………………..41
1-1-6-2- بیوتایپینگ………………………………………………………………………………………………………………..41
2-1-6-2- سروتایپینگ……………………………………………………………………………………………………………….42
3-1-6-2- روش­های ایمنولوژیك………………………………………………………………………………………………..42
1-3-1-6-2- الایزا…………………………………………………………………………………………………………………….43
2-3-1-6-2- IMS…………………………………………………………………………………………………………………..44
2-6-2- روش­های ژنوتیپی………………………………………………………………………………………………………….44
1-2-6-2- روش واكنش زنجیره ایی پلیمراز PCR)) …………………………………………………………………. 45
2-2-6-2- multiplex PCR……………………………………………………………………………………………………47
3-2-6-2- real-time PCR……………………………………………………………………………………………..47
4-2-6-2- روش تکثیر هم دمای وابسته به حلقه LAMP………………………………………………………………48
1-4-2-6-2- پرایمرهای LAMP………………………………………………………………………………………………..49
2-4-2-6-2- مكانیسم واكنش LAMP……………………………………………………………………………………….51
3-4-2-6-2- مشخصات روش LAMP………………………………………………………………………………………56
4-4-2-6-2- مواد لازم برای انجام واکنش LAMP………………………………………………………………………57
5-4-2-6-2- ارزیابی محصولات LAMP……………………………………………………………………………………60
6-4-2-6-2- مكانیسم تشكیل كدورت در واكنش LAMP…………………………………………………………….61
7-4-2-6-2- مزایای روش LAMP…………………………………………………………………………………………….62
7-2 مطالعات آزمایشگاهی…………………………………………………………………………………………………………….63
1-7-2- مطالعه بر روی سویه­های سالمونلا به روش الایزا……………………………………………………………….63
2-7-2- مطالعه بر روی سویه­های سالمونلا به روش PCR………………………………………………………………65
3-7-2- مطالعه بر روی سویه­های سالمونلا به روش LAMP…………………………………………………………..70
فصل سوم (مواد و روش ها)…………………………………………………………………………………………………………75
1-3 وسایل مورد استفاده………………………………………………………………………………………………………………76
2-3- مواد مورد استفاده ………………………………………………………………………………………………………………77
3-3- رنگ آمیزی گرم………………………………………………………………………………………………………………..79
4-3- تستهای بیوشیمیایی……………………………………………………………………………………………………………79
1-4-3- تست سیمون سیترات…………………………………………………………………………………………………….81
2-4-3- تست تریپل شوگر ایرون آگار(TSI) ………………………………………………………………………………81
3-4-3- تست SIM…………………………………………………………………………………………………………………82
4-4-3- تست اوره …………………………………………………………………………………………………………………..82
5-3- روش تهیۀ گلسیرول استوک از باکتری­ مورد نظر…………………………………………………………………..83
6-3- روش استخراج DNA ……………………………………………………………………………………………………..83
1-6-3- طرز تهیۀ محلول­های مورد نیاز برای استخراج DNA………………………………………………………..84
2-6-3- مراحل استخراج DNA …………………………………………………………………………………………………84
7-3- تعیین غلظت DNA با دستگاه اسپکتروفتومتر……………………………………………………………………….86
8-3- الکتروفورز………………………………………………………………………………………………………………………..87
1-8-3- طرز تهیه ژل آگارز…………………………………………………………………………………………………………88
2-8-3- طرز تهیۀ بافر (1X)TBE……………………………………………………………………………………………….88
9-3- واکنش PCR ……………………………………………………………………………………………………………………89
1-9-3- اجزا واکنش PCR………………………………………………………………………………………………………….91
2-9-3- روش انجام واکنش PCR با آنزیم SmarTaq DNA Polymerase……………………………….93
10-3- واکنش LAMP………………………………………………………………………………………………………………94
1-10-3- روش انجام واکنشLAMP …………………………………………………………………………………………95
11-3- آلوده سازی سس مایونز با باكتری مورد نظر………………………………………………………………………..96
12-3- آلوده سازی سالاد سبزیجات با باكتری مورد نظر…………………………………………………………………..97
13-3- تهیه پورپلیت و شمارش باكتری­ها………………………………………………………………………………………98
1-13-3 تهیه رقت……………………………………………………………………………………………………………………..98
2-14-3- کشت سطحی………………………………………………………………………………………………………………99
2-14-3- کشت پورپلیت…………………………………………………………………………………………………………….99
3-13-3 شمارش باكتری­ها…………………………………………………………………………………………………………..99
فصل چهارم (نتایج)……………………………………………………………………………………………………………………100
1-4- رنگ آمیزی گرم از باكتری……………………………………………………………………………………………….101
2-4- نتایج کشت نمونه ها روی محیط اختصاصی shigella– salmonella agar………………………101
2-4- تست­های بیوشیمیایی……………………………………………………………………………………………………..102
1-3-4- تست اوره………………………………………………………………………………………………………………….102
2-3-4- تست سیمون سیترات…………………………………………………………………………………………………..103
3-3-4 تست TSI ……………………………………………………………………………………………………………………104
4-3-4 تست SIM……………………………………………………………………………………………………………………105
5-3-4 تست متیل رد ……………………………………………………………………………………………………………….106
4-4- استخراج DNA …………………………………………………………………………………………………………….107
5-4- PCR………………………………………………………………………………………………………………………………108
1-5-4- حد تشخیص PCR………………………………………………………………………………………………………109
6-4- LAMP ……………………………………………………………………………………………………………………….110
1-6-4 حد تشخیص LAMP………………………………………………………………………………………………….112
فصل پنجم (بحث)……………………………………………………………………………………………………………………113
نتیجه­گیری………………………………………………………………………………………………………………………………..121
منابع و ماخذ……………………………………………………………………………………………………………………………..122
چكیده
سالمونلا باكتری گرم منفی، متحرك و باسیلی شكل است كه خصوصیات عمومی خانواده انتروباكتریاسه را دارا می‌باشد. سالمونلا و سروتیپ‌های آن منبع مهم آلودگی غذاهای انسانی و عامل پاتوژن بسیار قوی و بیماری­زا در انسان­هاست. امروزه بیش از 2450 سروتیپ سالمونلا شناسایی شده است كه برخی از این سروتیپ‌ها عامل بیماری‌هایی از قبیل تب تیفوئید و انتروكولیك در انسان می‌باشند. بیماری­های ناشی از این عامل یک معضل بزرگ بهداشتی در جهان به خصوص در کشورهای در حال توسعه از جمله کشور ما می باشد. بنابراین تشخیص سریع، دقیق و به موقع آن برای جلوگیری از اپیدمی و عوارض مخرب این باکتری ضروری به­نظر می­رسد.
روش­های مختلفی برای جداسازی باكتری سالمونلا از نمونه‌های محیطی وجود دارد كه شامل: روش‌های كشت سنتی و بیوشیمیایی، سرولوژیكی و مولكولی (از جمله PCR) است. تمام این روش­ها به زمان طولانی، تعداد زیاد باکتری در نمونه اولیه، تجهیزات گران­قیمت آزمایشگاهی و به افراد متخصص در این زمینه نیاز دارند.
هدف از این مطالعه بررسی کارایی روش نوین تشخیص مولکولی LAMP در تشخیص عامل عفونی سالمونلا تیفی می­باشد. بررسی نتایج در تشخیص مولکولی سالمونلاها نشان داد که روش LAMP روشی سریع، ارزان و اختصاصی است و به­جای دستگاه­های گران­قیمت PCR و برنامه چرخه حرارتی چند دمایی آن با استفاده از یک بلوك حرارتی بسیار ساده و ارزان و در یک دمای واحد 60 درجه سانتی­گراد و همچنین مشاهده کدورت حاصل از فرایند تکثیر ژن­ها در زمان كوتاه­تری به تشخیص اختصاصی این باكتری سالمونلا پرداخت.
این روش می تواند جهت تشخیص مولکولی سریع، دقیق و ارزان با كاربرد گسترده در آزمایشگاه­های تشخیصی و بخصوص تشخیص عوامل عفونی در آزمایشگاه­های مناطق محروم و آزمایشگاه­های سیار مورد استفاده قرار گیرد.
واژه های کلیدی : سالمونلا، تشخیص مولکولی، PCR، LAMP
مقدمه
اعضای جنس سالمونلا، باكتری گرم منفی، میله­ایی، بی­هوازی اختیاری و بدون اسپور هستند. از آنجا كه جایگاه اصلی و طبیعی این باكتری‌ها روده انسان و حیوانات می‌باشد اصطلاحاً آنها را باسیل‌های روده‌ای یا انتریك می‌نامند. از لحاظ شرایط رشد این میكروارگانیسم‌ها باكتری‌های انعطاف‌پذیری بوده و به آسانی با شرایط محیطی خود را هماهنگ می‌كنند این جنس از میكروارگانیسم‌ها به حرارت حساس‌اند. در درجه حرارت‌های پائین امكان بقای آنها بیشتر است .(Connie & Manuselis, 2000)
     اكثر سروتیپ‌های سالمونلا پاتوژن‌های بالقوه برای انسان و بسیاری از حیوانات می‌باشند. این باكتری‌ها در دستگاه گوارش مهره‌داران اعم از پستانداران و پرندگان و خزندگان و ماهی‌ها سیطره پیدا كرده، بسته به سروتیپ، شرایط و عوامل متعدد میزبانی، بیماری­هایی با نشانه‌های گوناگون و عوارض متفاوت ایجاد می‌كنند .(Merchant & Pocker, 1983)از جمله باكتری­های روده­ایی­ هستند كه موجب بیماری تب تیفوئید(حصبه)، تب شبه حصبه و بیماری­های ناشی از مواد غذائی در انسان می­گردند(Jay et al., 2005).
     بیماری­های ناشی از آلودگی مواد غذائی ناشی از سالمونلا را non typhoidal نامیده­اند. سالمونلا به­طور گسترده­­ایی در محیط زیست از قبیل آب، خاك و مدفوع حیوانات توزیع شده است (Cidrp, 2009). باكتری معمولاً از طریق مدفوع انسان و یا دام دفع شده و باعث آلودگی آب و غذا و محیط می‌گردد. مواد غذائی مانند گوشت، تخم­مرغ، مرغ، سس مایونز، سبزیجات و غیره ،از ناقل­های اولیه عفونت سالمونلا به انسان هستند(Dolye & Beuchat, 2007)..
   سالمونلای غیر­تیفوئیدی علت اصلی بیماری­های ناشی از مواد غذائی در سراسر جهان است. كه بر­آورد شده كه حدود 4/1 میلیون مورد در سال مورد عفونت غذائی سالمونلا قرار می­گیرند(Mead et al., 1999).
از این­رو شناخت و تشخیص به موقع سالمونلا از اهمیت خاصی برخوردار است. با ذكر تمامی این موارد به نظر می‌رسد تشخیص به موقع و كنترل باكتری از وظایف مهم آزمایشگاه‌های میكروب‌شناسی است. امروزه از 3 روش رایج به تشخیص باكتری می‌پردازند:
ـ روش‌های كشت سنتی و آزمایشات بیوشیمیایی.
ـ روش‌های سرولوژیكی.
ـ روش‌های مولكولی.
     برای تشخیص استفاده از روش­های سنتی مبتنی بر محیط كشت قابل قبول است ولی وقت­گیر است و برای تایید جواب نهایی چند روز به­طول می­انجامد .(Andrews & Hammack, 2007) علاوه­بر این، روش­های ایمنولوژیك مانند الایزا وIMS نیز برای شناسائی سالمونلا توسه یافته­اند.
. (Mansfield & Forsythe, 2000 ; FAVRIN , 2001) با این­حال اختصایت كم و هزینه­های بالا، استفاده ازین روش­ها را محدود كرده است. اخیرا روش­های مولكولی مانند PCR و real time PCR به­طور گسترده در شناسائی سالمونلا استفاده می­شوند كه روش­هایی كارآمد و حساس هستند.
Krascsenicsova et al., 2008) ; Eriksson & Aspan, 2007).
     با این­حال این روش­ها نیازمند سیكل حرارتی اختصاصی و دستگاه­های گران­قیمت­اند. از­این­رو نیاز به یك روش دقیق، حساس، آسان و به­صرفه­تر است. در سال 200 یك گروه ژاپنی یك روش تشخیص مولكولی به نام LAMP را معرفی كردند .(Notomi et al., 2000)از آن زمان روش LAMP به عنوان یك روش اختصاصی، حساس و سریع برای شناسائی پاتوژن­های ناشی از مواد غذائی مورد استفاده است. یك روش ساده، بدون نیاز به سیكل حرارتی اختصاصی و دستگاه­های گران­قیمت و به آسانی قابل اجرا است(Hara-Kudo et al., 2005; Notomi et al., 2000).
     هدف این تحقیق شناسائی باكتری سالمونلا تیفی در سالاد سبزیجات و سس مایونز آلوده با استفاده از روش LAMP، به­عنوان روشی سریع، حساس و اختصاصی می­باشد.
اهداف تحقیق در نگاه اجمالی

طراحی و بهینه­سازی روش LAMP بر اساس ژن تهاجمی invA سالمونلا تیفی
تعیین حد حساسیت روش PCR و LAMP به روی ژن تهاجمی invA سالمونلا تیفی
مقایسه دو روش PCR و LAM
مشخصات جنس سالمونلا
1-1-2- تاریخچه
در سال 1885 یك دامپزشك آمریكائی به نام دانیل المر سالمون برای اولین بار این باكتری را از خوك جدا كرد وآن را باسیلوس كلرا­سوئیس[1] نامید. در سال 1888 جرم دیگری توسط گارتنر از فردی كه در اثر گاستروانتریت ناشی از مصرف گوشت نپخته مرده بود جدا شد و آن­را باسیلوس انتریتیدیس نامید كه بعداً سالمونلا انتریتیدیس خوانده شد. در سال 1900 خواص این باكتری توسط فردی به نام لینیر به­طور رسمی تصویب گردید. از آنجا كه این ارگانیسم ها شبیه به باكتری های جدا شده توسط سالمون بودند، به همین جهت به افتخار كاشف اولیه این باكتری سالمونلا[2] نامیدند(Roumagnac et al., 2006).
     در فاصله بین سال­های 1925ـ1900 بزرگ­ترین رویداد در كشف سرولوژیكی آنتی‌ژن‌های سوماتیك و فلاژلا در مورد گروه سالمونلا بوسیله لیگنیرز انجام شد. در سال 1926 تركیبات پادگنی سالمونلا طبقه‌بندی گردید و جدولی به نام جدول كافمن ـ وایت ایجاد شد. در حال حاضر این جدول دارای حدود 2500 سروتیپ است (Bhatia & Nabb , 1980) .
     سالمونلا بطور گسترده در طبیعت توزیع شده است مانند آب آلوده، خاك حاوی مدفوع حیوانات و غیره. به طور عمده این باكتری­ها در روده­ی حیوانات ساكن است و مخزن اصلی آلودگی مرغ، تخم مرغ، دام، حیوانات خانگی و خزندگان است(Cidrp, 2009).
 2-1-2- خواص شكلی
اعضای جنس سالمونلا باكتری­های میله­ای شكل و اندازه­ی آن 5-2 ´5/1-7 /. میكرون بوده است.گرم منفی، بدون اسپور و متعلق به خانواده­ی انتروباكتریاسه­اند (J. Antonio , 2009 ; Dolye & Beuchat, 2007) .. اكثر اعضای این جنس متحرك و با تاژه­ی پری­تریش­اند به­جز چند مورد استثناء مانند سالمونلا گالیناروم[3] و سالمونلا پولوروم[4] (et al., 2005 Hara-Kudo).
3-1-2- خواص بیوشیمیایی
اعضای این جنس قادر به تخمیر گلوكز بوده ولی از تخمیر ساكارز و لاكتوز نا­توانند. بیشتر انواع سالمونلا ها گلوكز، مالتوز، مانیتول، دولسیتول، دكسترین و سوربیتول را تخمیر می كنند و اسید و گاز بوجود می آورند. اكثر سویه­ها H2sرا از منبع سولفوری معدنی تولید كرده و تولید H2S یکی از واکنش های کلیدی در تشخیص سالمونلاها می­باشد. به استثنای سروتیپ تیفی[5] در بیشتر موارد جدا شده از گلوکز گاز ایجاد می­کنند. در سیترات به عنوان تنها منبع كربن رشد می­كنند اما برخی از گونه ها مانند سالمونلاتیفی و سالمونلا پاراتیفی A سیترات منفی هستند Aksoy, 2004)). این باكتری اكسیداز منفی و كاتالاز مثبت بوده. از تولیدات این باكتری لیزین در كربوكسیلات، سولفات هیدروژن وارنیتین می‌باشد.
( Alcamo , 1997 ; Connie & Manuselis, 2000) .
   از دیگر ویژگیهای بیوشیمیایی این است كه اكثر سالمونلاها عدم تولید اندول، عدم تولید آنزیم‌های اوره آز،   لیپاز، دزاكسی ریبونوكلئاز، فنیل‌آلانین و تریپتوفان دآمیناز، دكربوكسیلاسیون اسیدهای آمینه لیزین، اورنیتین و آرژنین، واكنش مثبت در آزمایش متیل‌رد(MR) و واكنش منفی در آزمایش وژس ـ پروسكوئر (VP) مثبت می‌باشد.( (Alcamo , 1997 ; Dolye & Beuchat , 2007.
 4-1-2- مقاومت در برابر عوامل فیزیكی و شیمیایی
این باكتری روی محیط كشت ماهها زنده می­مانند. حرارت 60 درجه را 15 تا 20 دقیقه تحمل می­كنند، سالمونلاها مدت 13 ماه در لاشه­های آلوده نگهداری شده در یخچال، 120 روز درآب، 280 روز در خاك باغچه و مدت بسیار طولانی در شیرخشك­های بدون چربی و موادغذایی دارای تخم مرغ زنده می­مانند. سالمونلاها نسبت به سرما مقاوم بوده و مدت3 ماه در برف و یخ زنده مانده واز این طریق می­توانند اپیدمی به­وجود آورند. كلرامنفیكل استرپتومیسین و بسیاری از آنتی بیوتیك های وسیع الطیف بر آن موثرند پنی سیلین بر آن كاملا بی­اثر است. سالمونلاها همچنین نسبت به املاح صفراوی مقاومند وبه همین دلیل از این مواد نیز علاوه بر رنگ­ها در تهیه محیط‌های غنی‌كننده استفاده می‌كنند Aksoy, 2004)).
 5-1-2- خواص كشت
اعضای این جنس هوازی بی­هوازی اختیاری می­باشند. مزوفیل بوده و رشد بهینه­ی آن در دمای 37درجه است.با این­حال برخی از سالمونلا­هادر شرایط شدید زیست محیطی مانند درجه حرارت بالای 54 درجه و سرمای 4-2 درجه را تحمل كنند. pH مناسب برای رشد آن 5/7-5/ 6 می باشد ولی pH حدود 9- 5/4  را می تواند تحمل كند و اگر pH پائین­تر از 4 برود باعث از بین رفتن میكرو­ارگانیسم می­شود. pH بیشتر از 9 صرفا از رشد آن جلوگیری می­كند. غلظت نمك 3/ 5 % بالاتر عاملی در جهت جلوگیری از رشد و تكثیر باکتری است (Jay et al., 2005 ; Doyle.M, 2007).
     اکثر سالمونلاها در روی آگار مغذی بعد از 24 ساعت پرگنه هایی به قطر 3-2 میلی متر و به رنگ سفید، خاکستری، مرطوب ،کروی، مسطح، برجسته و صاف ایجاد می کنند. اندازه و درجه کدورت پرگنه ها به نوع سروتیپ بستگی دارد. سالمونلاها در محیط های مایع نظیر آبگوشت مغذی و آب پپتونه رشد زیادی دارند Jay et al., 2005)).
     انواع محیط‌های غنی كننده می‌توان به آبگوشت تتراتیونات آبگوشت سلنیت F، آبگوشت را پاپورت (حاوی كلریدمنیزیم و سبزمالاشیت) و آبگوشت سلنیت سیستین اشاره كرده معمولاً بعد از 24ـ18 ساعت از محیط‌های غنی كننده روی محیط‌های انتخابی جامد كشت می‌دهند. از محیط‌های انتخابی و تفریقی می‌توان به محیط مك‌كانكی و محیط سالمونلا ـ شیگلا، محیط سبز درخشان، محیط آهن لیزین‌دار، محیط داكسی كلات سیترات یا محیط لیفسون(DCA)، محیط هكتوئن و محیط داكسی كلات ـ لیزین ـ گزیلور اشاره كرد. محیط بیسموت سولفات آگار، نیز به عنوان محیط انتخابی برای جداسازی سالمونلا مورد استفاده قرار می‌گیرد چرا كه قدرت انتخابگری این محیط بالاست. این باكتری‌ها معمولاً كربوهیدرات را با تولید اسید و گاز تخمیر می‌كنند.